Nota Applicativa Microbiologia N.8 – Il conteggio delle colonie in piastra Petri
- Procedura Operativa Standard
La Normativa ISO/DIS 7954 fornisce precise indicazioni sulle modalità di calcolo di conteggio di conta microbica in piastra Petri sia per batteri (unità formanti colonia per g, ml) che per miceti (unità formanti tallo per g, ml).
Le diluizioni in successione del campione in esame devono essere scelte in modo che il numero di colonie che si sviluppano sul terreno agarizzato della piastra Petri sia compreso tra 30 e 300 unità (idealmente 150). Una diluizione troppo spinta perde in precisione mentre una forte concentrazione produce super-posizionamento delle colonie con inevitabili difficoltà di conteggio.
Il tempo di incubazione deve essere stabilito in funzione della buona “leggibilità” delle piastre Petri inoculate: l’incubazione dovrebbe essere arrestata prima che diventi difficile contare le colonie; ciò è particolarmente valido quando si devono contare muffe.
- Determinazione del numero di microrganismi per g / ml
Il conteggio si esegue applicando la seguente formula:
C
ufc/g oppure ufc/ml oppure uft/g oppure uft/ml = —————————–
(n1+0,1 x n2) x f
dove:
C = somma delle colonie contate su tutte le piastre Petri considerate
n1= numero di piastre scelte al valore di diluizione più basso
n2= numero di piastre scelte alla diluizione successiva
f = fattore di diluizione della diluizione più bassa, espresso con il numero 10 elevato alla potenza negativa
Il risultato deve essere espresso da un numero compreso tra 1,0 e 9,9 moltiplicato per 10x.
Si scelgono due diluizioni successive alle quali sia possibile eseguire facilmente il conteggio.
- Esempio
Si sono approntate 3 piastre Petri per ogni valore di diluizione del campione.
Dopo incubazione sono stati eseguiti i seguenti conteggi sulle piastre Petri:
* alla diluizione 10-2 = 88+61+98
* alla diluizione 10-3 = 31+24+49
88+61+98 + 31+24+49 351
ufc/g oppure ufc/ml = ————————————— = ———- = 10.636 = 10.000 I = 1,0 X 104
3 + (0,1 x 3) / 100 0,033
