I suggerimenti per risolvere eventuali problemi incontrati nell’uso delle colture stock di riferimento “Microbiologics”
La guida “Trouble Shooting Guide” indica possibili cause e suggerimenti ai differenti problemi che si possono incontrare.
| TROUBLE SHOOTING GUIDEGUIDA ALLA RISOLUZIONE DI PROBLEMI | ||
| PROBLEMA | POSSIBILE CAUSA | SUGGERIMENTI |
| Mancanza di sviluppo microbico | 1) Il pellet liofilizzato è stato conservato correttamente? | 1a) Refrigerare i microrganismi liofilizzati a +2/8°C al momento dell’arrivo in laboratorio |
| 2) Il pellet liofilizzato è stato idratato correttamente? | 2a) Utilizzare il pellet idratato entro 30 minuti dalla sua preparazione2b) Vibrio & Shewanella devono essere idratati solo in BHI, TSB, oppure 0.85% saline oppure Kwik-Stik fluid | |
| 3) E’ stato usato il terreno corretto? | 3a) Alcuni microrganismi richiedono speciali terreni: ad esempio Bordetella pertussis richiede il Bordet Gengou oppure il Charcoal medium3b) Con gli anaerobi si deve iniziare con un terreno anaerobico od agar pre-ridotto
3c) E’ meglio iniziare con i microrganismi liofilizzati con un agar non selettivo |
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| 4) Il microrganismo è stato incubato alla corretta temperatura? | 4a) Alcuni microrganismi non si sviluppano a 35°C: ad esempio il Geobacillus stearothermophylus cresce a 55°C; alcuni lieviti preferiscono 25 oppure 35°C4b) Accertare che il termometro sia accurato
4c) Accertare che all’interno dell’incubatore ci sia uniformità di temperatura ed umidità |
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| 5) Il microrganismo è stato incubato alla corretta atmosfera? | 5a) Il Campylobacter richiede condizioni di micro-aerofilia5b) Utilizzare sempre un indicatore di anaerobiosi quando si lavora in anaerobiosi | |
| 6) Il microrganismo è stato incubato per un tempo sufficiente? | 6a) Alcuni microrganismi necessitano diversi giorni per svilupparsi: ad esempio Micromonas 5-7 giorni, Porphyromonas 5-7 giorni, Prevotella 5-7 giorni | |
| Contaminazione | 1) Il microrganismo liofilizzato si è sviluppato in brodo? | 1a) I contaminanti si moltiplicano rapidamente in brodo. E’ meglio iniziare con i microrganismi in agar |
| Risultati inaspettati | 1) E’ stato il microrganismo sub-colturato correttamente? | 1a) Non eseguire test sullo sviluppo del pellet1b) Sub-colture ripetute possono indurre mutazioni
1c) Usare sempre colture “fresche” |
| 2) L’inoculo era troppo piccolo? | 2a) Le colonie di Bacteroides ureolyticus sono molto piccole; eseguire sub-colture con diverse piastre Petri | |
| 3) E’ stato usato il corretto microrganismo per il controllo di qualità? | 3a) Usare il microrganismo consigliato dal fabbricante oppure un equivalente | |
