Microbiologia degli alimenti – Metodo orizzontale per la ricerca di Bacillus cereus

Tecnica del Most probable number e metodo di riconoscimento ISO 21871 (2006)

Preparare il campione secondo quanto previsto dall’ International Standard.

1) Arricchimento in brodo selettivo: inoculare tre provette contenenti il brodo selettivo, Tryptone soya polymyxin broth (TSPB), con una certa quantità della prima diluizione e delle successive (tecnica del MPN). Preparare un numero sufficiente di diluizione in modo tale che le provette corrispondenti alla diluizione finale diano un risultato negativo. Incubare a 30°C per 48h ± 4h.
Nel caso si volesse fare la conta solamente delle spore del Bacillus cereus sottopporre la prima diluizione ad un trattamento termico pari a 80°C per 10 min.

2) Riconoscimento: da ogni provetta prelevare un’ansa di coltura e strisciarla su polymyxin pyruvate egg yolk mannitol bromothymol blue agar (PEMBA) o su mannitol egg yolk polymyxin agar (MYP). Incubare a 37°C (PEMBA) o 30°C (MYP) per 18h-24h. se le colonie non dovessero essere nitide incubare le piastre per altre 24h.

3) Conferma: conferma mediante test biochimici (fermentazione del glucosio, Voges-Proskauer test e riduzione dei nitrati) e attraverso l’uso del microscopio

4) Calcolo ed espressione dei risultati: per ogni diluizione di TSPB registrare il numero delle provette in cui la presenza di Bacillus cereus è stata confermata dai test di conferma. Da tre diluizioni consecutive si ottiene l’indice MPN (ISO 7218:2007). Il numero più probabile di Bacillus cereus per grammo si ottiene moltiplicando l’indice di MPN per la diluizione scelta più bassa.